Маҳсулот
Маҷмӯи муайянкунии Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR барои 2019-nCoV
Истифодаи пешбинишуда
Ин маҷмӯа барои муайян кардани сифатии коронавируси нав (2019-nCoV) бо истифода аз тампонҳои гулӯ, тампонҳои бинӣ, моеъи шустани бронхоалвеолярӣ, балғам истифода мешавад. Натиҷаи ташхиси ин маҳсулот танҳо барои истинодҳои клиникӣ аст ва он набояд ҳамчун ягона истифода шавад. далелҳои ташхиси клиникӣ ва табобат.Таҳлили ҳамаҷонибаи вазъият дар якҷоягӣ бо зуҳуроти клиникии бемор ва дигар санҷишҳои лабораторӣ тавсия дода мешавад.
Принсипи санҷиш
Маҷмӯа ба технологияи як қадами RT- PCR асос ёфтааст.Дарвоқеъ, генҳои нави коронавируси соли 2019 (2019-nCoV) ORF1ab ва N ҳамчун минтақаҳои ҳадафи афзоиш интихоб карда шуданд.Примерҳои мушаххас ва зондҳои флуоресцентӣ (зондҳои гении N бо FAM нишон дода шудаанд ва зондҳои ORF1ab бо HEX нишон дода шудаанд) барои ошкор кардани 2019 РНК навъи нави коронавирус дар намунаҳо тарҳрезӣ шудаанд.Маҷмӯа инчунин як системаи муайянкунии назорати дохилии эндогениро дар бар мегирад (зонди генҳои назорати дохилӣ бо CY5 нишонгузорӣ шудааст) барои назорат кардани раванди ҷамъоварии намуна, RNA ва амплификацияи PCR ва ба ин васила коҳиш додани натиҷаҳои манфии бардурӯғ.
Компонентхои асосй
| Компонентхо | Ҳаҷм（48Т/Маҷмӯа) |
| Маҳлули реаксияи RT-PCR | 96мл |
| Пробемикстури nCOV TaqMan (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | 864мл |
| Назорати манфӣ | 1500мл |
| Назорати мусбати nCOV (l ORF1ab N Gene) | 1500мл |
Реагентҳои худӣ: реагентҳои экстраксияи РНК ё тозакунӣ.Назорати манфӣ/мусбатӣ: Назорати мусбӣ РНК мебошад, ки порчаи ҳадафро дар бар мегирад, дар ҳоле ки назорати манфӣ оби бе кислотаи нуклеинӣ мебошад.Ҳангоми истифода, онҳо бояд дар истихроҷ иштирок кунанд ва бояд сирояткунанда ҳисобида шаванд.Онҳо бояд мувофиқи қоидаҳои дахлдор коркард ва нобуд карда шаванд.
Ген истинодҳои дохилӣ гени RnaseP инсон аст.
Шароити нигоҳдорӣ ва мӯҳлати истифода
-20±5℃, аз яхкунӣ ва обшавии такрории зиёда аз 5 маротиба худдорӣ кунед, ки барои 6 моҳ эътибор дорад.
Воситаи татбиқшаванда
Бо FAM / HEX / CY5 ва дигар асбобҳои флуоресцентии PCR.
Талабот ба намуна
1.Намудҳои намунаҳои татбиқшаванда: тампонҳои гулӯ, тампонҳои бинӣ, моеъи шустани бронхоалвеолярӣ, балғам.
2. Ҷамъоварии намуна (техникаи асептикӣ)
Тампончаи ҳалқӣ: бодомакҳо ва девори паси ҳалқумро дар як вақт бо ду тампон пок кунед, сипас сари тампонро ба найчаи озмоишӣ, ки дорои маҳлули намунавӣ аст, ғӯтонед.
Балғам: Пас аз он ки бемор сулфаи амиқ дорад, балғами сулфаро дар найчаи озмоишии сарпӯши буранда, ки дар он маҳлули намуна гирифта шудааст, ҷамъ кунед;моеъи шустани бронхоалвеолярӣ: Гирифтани намуна аз ҷониби мутахассисони соҳаи тиб.3.Нигоҳдорӣ ва интиқоли намунаҳо
Намунаҳо барои ҷудокунии вирус ва санҷиши РНК бояд ҳарчи зудтар санҷида шаванд.Намунаҳоеро, ки дар давоми 24 соат муайян кардан мумкин аст, дар ҳарорати 4℃ нигоҳ доштан мумкин аст;онҳое, ки дар давоми 24 муайян карда намешаванд
соат бояд дар -70 ℃ ё камтар нигоҳ дошта шавад (агар ҳолати нигоҳдории -70 ℃ мавҷуд набошад, онҳо бояд
муваққатан дар яхдон -20 ℃ нигоҳ дошта мешавад).Намунаҳо бояд ҳангоми интиқол аз яхкунӣ ва обшавии такрорӣ худдорӣ кунанд.Намунаҳо бояд ҳарчи зудтар пас аз ҷамъоварӣ ба лаборатория фиристода шаванд.Агар намунаҳоро ба масофаи дур интиқол додан лозим бошад, нигоҳдории яхи хушк тавсия дода мешавад.
Усулҳои санҷиш
1 Коркарди намуна ва истихроҷи РНК (минтақаи коркарди намуна)
Тавсия дода мешавад, ки 200 мкл намунаи моеъ барои истихроҷи РНК гирифта шавад.Барои қадамҳои истихроҷи алоқаманд, ба дастурҳои маҷмӯаҳои истихроҷи RNA муроҷиат кунед.Ҳам манфӣ ва ҳам манфӣ
назорат дар ин маҷмӯа дар истихроҷи ҷалб карда шуданд.
2 Омодасозии реагенти PCR (минтақаи омодасозии реактив)
2.1 Ҳама ҷузъҳоро аз маҷмӯа хориҷ кунед ва дар ҳарорати хонагӣ об кунед ва омехта кунед.Пеш аз истифода дар 8000 чархзанӣ чанд сония центрифуга кунед;микдори зарурии реактивхоро хисоб карда, системаи реакциониро тавре тартиб медихад, ки дар чадвали зерин нишон дода шудааст:
| Компонентхо | N порция (системаи 25µl) |
| Пробемикстури nCOV Primer TaqMan | 18 мкл × Н |
| Маҳлули реаксияи RT-PCR | 2 мл × Н |
| *N = шумораи намунаҳои санҷидашуда + 1 (назорати манфӣ) + 1 (nCOVназорати мусбӣ) | |
2.2 Пас аз бодиққат омехта кардани ҷузъҳо, дар муддати кӯтоҳ центрифуга кунед, то ки тамоми моеъ дар девори қубур ба қаъри қубур афтад ва сипас системаи пурқувваткунии 20 мкл ба найчаи ПТР аликвот кунед.
3 Гирифтани намуна (минтақаи тайёр кардани намуна)
Пас аз истихроҷ 5 мкл назорати манфӣ ва мусбӣ илова кунед.РНК-и намунаи санҷидашуда ба найчаи реаксияи PCR илова карда мешавад.
Қубурро маҳкам пӯшед ва дар 8000 чархзанӣ барои чанд сония центрифуга кунед, ки онро ба минтақаи муайянкунии пурқувват интиқол диҳед.
4 Амплификацияи PCR (минтақаи муайянкунии пурқувват)
4.1 Туби реаксияро дар ҳуҷайраи намунаи асбоб ҷойгир кунед ва параметрҳоро ба таври зерин муқаррар кунед:
| марҳила | Сикл рақам | Ҳарорат(°C) | Вақт | ҷамъоварӣсайт |
| Баръакстранскрипция | 1 | 42 | 10мин | - |
| Пеш аз денатуратсияn | 1 | 95 | 1дақ | - |
| Сикл | 45 | 95 | 15с | - |
| 60 | 30с | ҷамъоварии маълумот |
Интихоби канали муайянкунии асбоб: Барои сигнали флуорессенсия канали FAM、HEX、CY5-ро интихоб кунед.Барои истинод флюоресцентӣ ҲЕҶ, лутфан ROX-ро интихоб накунед.
5 Таҳлили натиҷаҳо (Лутфан ба дастурҳои таҷрибавии ҳар як асбоб барои танзим муроҷиат кунед)
Пас аз реаксия, натиҷаҳоро захира кунед.Пас аз таҳлил, арзиши ибтидоӣ, арзиши ниҳоӣ ва ҳадди ниҳоии хатти асосиро мувофиқи тасвир танзим кунед (истифодабаранда метавонад мувофиқи вазъияти воқеӣ танзим карда шавад, арзиши ибтидоиро ба 3 ~ 15 муқаррар кардан мумкин аст, арзиши ниҳоӣ метавонад ба 5~20, тасҳеҳ) дар графики логарифмӣ Дар остонаи равзана хати остона дар марҳилаи логарифмӣ ва каҷи пурқувваткунии назорати манфӣ хати рост ё поёнтар аз остона аст).
6 Назорати сифат (Назорати мурофиавӣ ба санҷиш дохил карда шудааст) Назорати манфӣ: Ҳеҷ гуна каҷи пурқувват барои каналҳои FAM, HEX, CY5 муайян карда нашудааст.
Назорати мусбати COV: хати каҷравии равшани каналҳои муайянкунии FAM ва HEX, арзиши Ct≤32, аммо ҳеҷ гуна каҷи пурқувваткунии канали CY5;
Талаботи дар боло зикршуда бояд дар як вақт дар як озмоиш иҷро карда шаванд;вагарна тачриба беэътибор аст ва онро такрор кардан лозим меояд.
7 Муайян кардани натиҷаҳо.
7.1 Агар дар каналҳои FAM ва HEX-и намунаи санҷиш хати каҷи пурқувват ё арзиши Ct> 40 набошад ва дар канали CY5 каҷравии амплификация мавҷуд бошад, метавон хулоса кард, ки коронавируси нави 2019 (2019-nCoV) вуҷуд надорад. РНК дар намуна;
.2 Агар намунаи санҷишӣ дар каналҳои FAM ва HEX каҷҳои равшани амплификация дошта бошад ва арзиши Ct ≤40 бошад, метавон хулоса кард, ки намуна барои коронавируси нави соли 2019 (2019-nCoV) мусбат аст.
7.3 Агар намунаи санҷишӣ танҳо дар як канали FAM ё HEX хатти равшани пурқувват дошта бошад ва арзиши Ct ≤40 бошад ва дар канали дигар хатти пурқувваткунӣ вуҷуд надошта бошад, натиҷаҳо бояд аз нав санҷида шаванд.Агар натиҷаҳои санҷиши такрорӣ мувофиқ бошанд, намунаро барои нав мусбат арзёбӣ кардан мумкин аст
коронавирус 2019 (2019-nCoV).Агар натиҷаи санҷиши такрорӣ манфӣ бошад, метавон хулоса кард, ки намуна барои коронавируси нави 2019 (2019-nCoV) манфӣ аст.
Арзиши доварии мусбӣ
Усули каҷи ROC барои муайян кардани арзиши CT-и маҷмӯа истифода мешавад ва арзиши истинод ба назорати дохилӣ 40 аст.
Тафсири натиҷаҳои санҷиш
1.Ҳар як озмоиш бояд барои назорати манфӣ ва мусбат санҷида шавад.Натиҷаҳои санҷишро танҳо вақте муайян кардан мумкин аст, ки назорат ба талаботи назорати сифат мувофиқат кунад
2.Вақте ки каналҳои муайянкунии FAM ва HEX мусбатанд, натиҷа аз канали CY5 (канали назорати дохилӣ) аз сабаби рақобати система метавонад манфӣ бошад.
3. Вақте ки натиҷаи назорати дохилӣ манфӣ бошад, агар каналҳои муайянкунии FAM ва HEX-и найчаи озмоишӣ низ манфӣ бошанд, ин маънои онро дорад, ки система ғайрифаъол аст ё амалиёт нодуруст аст, санҷиш беэътибор аст.Аз ин рӯ, намунаҳо бояд аз нав санҷида шаванд.
